Fer Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402734-ACT

O FER humano codifica a proteína Fer, uma tirosina‑quinase proteica não receptora da família FES/Fer, que transmite sinais a jusante de receptores de fatores de crescimento e de complexos de adesão. Fer participa do controlo dependente de fosforilação da dinâmica do citoesqueleto, da integridade das junções célula–célula e da motilidade celular por meio de vias que envolvem sinalização por integrinas, complexos associados a caderinas e a regulação de GTPases da família Rho. Ao modular os outputs de sinalização associados a MAPK e PI3K/AKT, Fer ajuda a coordenar respostas de proliferação e sobrevivência a estímulos extracelulares. A atividade ou expressão desregulada de FER tem sido associada a comportamento invasivo alterado e a redes de sinalização aberrantes em múltiplos contextos relevantes para o cancro, sustentando o seu uso como um nó mecanístico em estudos de sinalização oncogénica e de fenótipos associados à metástase.

Fer O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FER sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Fer O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FER em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FER, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Fer. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FER nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Fer no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Fer em células tumorais com expressão de FER silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.