FcRn Double Nickaseプラスミド (h): sc-400689-NIC

FCGRTは新生児Fc受容体（FcRn）をコードしている。FcRnはMHCクラスI関連のヘテロ二量体で、pH依存的にIgGおよびアルブミンに結合し、細胞内でのリサイクル（サルベージ）と双方向のトランスサイトーシスを仲介する。FcRnはエンドソーム輸送経路の中で機能し、酸性pHでリガンドを選別して細胞表面で放出することで、抗体恒常性、抗原の取り扱い、粘膜免疫の形成に寄与する。内皮および上皮コンパートメントでは、FcRnがFc介在性輸送とIgGリサイクルに影響し、IgGの利用可能性や免疫複合体動態が重要となる炎症性シグナルの文脈に作用する。FcRn/FCGRT活性の変化は、IgGの持続性やFc依存性免疫応答への影響を介して、自己免疫や炎症性疾患の機序との関連が検討されてきた。

FcRn ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FCGRT 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FCGRT内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FCGRTの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FCGRTが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。