FAT3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404132-ACT

FAT3 codifica uma grande caderina atípica que contribui para a adesão célula–célula dependente de cálcio e ajuda a organizar a arquitetura dos tecidos por meio da regulação da polaridade celular, da migração e da dinâmica do citoesqueleto. Como membro da família de caderinas FAT, a FAT3 está implicada em programas de sinalização dependentes de contato que se cruzam com a polaridade planar das células e com vias associadas à adesão que controlam a morfogênese e o padrão neuronal. Alterações na expressão de FAT3 ou perturbações na sua regulação têm sido associadas a mudanças na motilidade celular e nos estados de diferenciação, tornando-a relevante para o estudo do remodelamento impulsionado pela adesão em contextos de desenvolvimento e doença. Em sistemas modelo humanos, FAT3 serve como um ponto útil para investigar como receptores de adesão ancorados à membrana influenciam respostas transcricionais e o comportamento celular.

FAT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FAT3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAT3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FAT3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FAT3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAT3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FAT3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAT3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAT3 em células tumorais com expressão de FAT3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.