FAT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-410778-NIC

FAT1は、巨大な膜貫通型の細胞接着因子／極性制御因子として機能する非典型カドヘリンをコードしており、細胞骨格の編成、平面内細胞極性（PCP）様の過程、ならびに接触依存的なシグナル伝達を協調的に制御する。FAT1はHippo経路の出力調節や、Wnt/βカテニン関連プログラムとのクロストークに関与することが示されており、細胞移動、組織構築、メカノトランスダクションに影響を及ぼす。FAT1の機能異常や変異は複数の腫瘍種で報告されているほか、発生および腎臓の表現型とも関連しており、形態形成や上皮の完全性を研究する上で広範な重要性を支持している。培養ヒト細胞では、FAT1の撹乱は接着依存的シグナル伝達、浸潤ダイナミクス、極性制御を検証するために一般的に用いられる。

FAT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FAT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FAT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FAT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FAT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。