Plasmide CRISPR d'Activation (h) FAT1: sc-410778-ACT

FAT1 code une cadhérine atypique qui contribue à l’adhésion cellule–cellule, à la polarité épithéliale et à la régulation de l’organisation du cytosquelette au cours de la morphogenèse tissulaire. Par des interactions qui modulent la signalisation de la voie Hippo et les programmes de polarité planaire, FAT1 aide à coordonner le contrôle de la croissance dépendant des contacts, la migration et l’organisation directionnelle des cellules. Une expression dérégulée de FAT1 ou des mutations de ce gène ont été associées à des dynamiques d’adhésion altérées et à des états de signalisation aberrants impliqués dans la biologie des cancers et des troubles du développement. Dans des modèles cellulaires humains, FAT1 est fréquemment étudié pour ses rôles dans les phénotypes associés à l’invasion, la mécanotransduction et le contrôle transcriptionnel en aval des signaux jonctionnels.

FAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

FAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de FAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de FAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie FAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de FAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.