Plásmido CRISPR de Activación (h) Fascin 1: sc-402535-ACT

FSCN1 codifica fascinina 1, una proteína que agrupa filamentos de actina y organiza haces paralelos en filopodios, lamelipodios y otras estructuras protrusivas que sustentan los cambios en la forma celular y la migración dirigida. Al regular la remodelación del citoesqueleto y la dinámica de adhesión, la fascinina 1 contribuye a procesos como la motilidad, el comportamiento tipo invasivo y la mecanotransducción, integrándose con la señalización de las GTPasas Rho y las vías de polimerización de actina. Se ha descrito una expresión alterada de FSCN1 en múltiples contextos de cáncer e inflamación, y con frecuencia se asocia con fenotipos migratorios aumentados y mayor potencial metastásico. Estas características hacen de FSCN1 una diana útil para estudiar la regulación del citoesqueleto, las interacciones célula–matriz y los programas transcripcionales vinculados a la transición epitelio–mesénquima.

Fascin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FSCN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Fascin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FSCN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FSCN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Fascin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FSCN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Fascin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Fascin 1 en células tumorales con expresión de FSCN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.