Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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FAS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420287
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- FAS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico FAS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: FAS Antibody (C236): sc-21730
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
FAS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420287 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Fas codifica FAS (CD95/APO-1), un recettore di morte della superfamiglia dei recettori del TNF che avvia l’apoptosi estrinseca in seguito al legame con il ligando FAS e alla successiva formazione del complesso di segnalazione inducente la morte (DISC). Questa cascata di segnalazione recluta FADD e attiva CASP8/CASP10, collegandosi alle caspasi effettrici a valle e intersecando, a seconda del contesto cellulare, l’apoptosi mitocondriale e i programmi di sopravvivenza associati a NF-κB. Nell’omeostasi immunitaria del topo, la morte cellulare indotta dall’attivazione mediata da FAS limita l’espansione dei linfociti e sostiene la tolleranza periferica. Una segnalazione Fas/FAS deregolata è associata ad apoptosi difettosa, attivazione immunitaria cronica, linfoproliferazione e risposte alterate al danno tissutale nei modelli di infiammazione.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO FAS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Fas in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Fas insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Fas a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina FAS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Fas per lo studio della segnalazione di FAS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Fas critici per la funzione di FAS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Fas per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal FAS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal FAS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Fas. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal FAS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR FAS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Fas per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Fas definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.