FANCM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403495-ACT

ヒトFANCMは、DNA複製ストレス下でゲノム安定性を維持するファンコニ貧血（FA）経路において機能するDNAトランスロカーゼをコードする。FANCMは停止した複製フォークや鎖間架橋（interstrand crosslink）を認識し、FAコア複合体、ATR依存的チェックポイントシグナル、相同組換え因子と協調して、フォークのリモデリングと修復を促進する。複製フォークの通過（traverse）や再開、ならびに異常な組換えの抑制に関わることで、FANCMは染色体切断や変異誘発を抑える。FANCMを介した修復の破綻は、架橋修復能の低下やゲノム不安定性表現型と関連しており、ファンコニ貧血の病態およびがんに伴うDNA損傷応答の変化に関わることが示されている。

FANCM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FANCMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FANCM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FANCM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFANCM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FANCMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFANCM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFANCM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFANCM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFANCM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。