FANCA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403205-ACT

FANCA codifica um componente central da via de reparo de DNA da anemia de Fanconi (FA), que coordena o reparo de ligações cruzadas intercadeias do DNA e estabiliza as forquilhas de replicação durante a fase S. FANCA participa do complexo central de FA, que promove a monoubiquitinação de FANCD2 e FANCI, permitindo o processamento nucleolítico a jusante e o reparo associado à recombinação homóloga. A disrupção de FANCA compromete a integridade do genoma, aumenta a quebra cromossômica e sensibiliza as células a danos por agentes formadores de ligações cruzadas, vinculando esse gene à patologia molecular da anemia de Fanconi e a mecanismos mais amplos de estresse de replicação. Como resultado, FANCA é amplamente estudado em vias que regulam a sinalização de dano ao DNA, checkpoints do ciclo celular e a manutenção da estabilidade cromossômica.

FANCA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FANCA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FANCA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FANCA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FANCA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FANCA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FANCA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FANCA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FANCA em células tumorais com expressão de FANCA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.