FANCA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403205-ACT

FANCAは、S期においてDNA鎖間架橋の修復を協調的に進め、複製フォークを安定化させるファンコニ貧血（FA）DNA修復経路の中核構成要素をコードする。FANCAはFAコア複合体の一員としてFANCD2およびFANCIのモノユビキチン化を促進し、これにより下流のヌクレアーゼによる処理と相同組換えに関連した修復が可能となる。FANCAの機能障害はゲノム完全性を損ない、染色体切断を増加させ、架橋形成性損傷に対する細胞感受性を高めることから、本遺伝子はファンコニ貧血の分子病態およびより広範な複製ストレス機構と関連づけられている。その結果、FANCAはDNA損傷シグナル伝達、細胞周期チェックポイント、ならびに染色体安定性維持を司る経路において広く研究されている。

FANCA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FANCAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FANCA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FANCA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFANCA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FANCAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFANCA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFANCA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFANCA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFANCA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。