FAM35A Double Nickaseプラスミド (h2): sc-416298-NIC-2
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FAM35A Double Nickaseプラスミド (h2)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FAM35Aダブルニカースプラスミド（h2）およびFAM35Aダブルニカースプラスミド（h22）は、FAM35Aを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FAM35A Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-416298-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトFAM35Aはゲノム維持に関与する核内タンパク質をコードしており、DNA二本鎖切断（DSB）修復における経路選択を調節するとともに、損傷部位での末端リセクションに影響を与えることが示されています。さらに、相同組換えの制御やBRCA1/BRCA2関連修復ネットワークとの機能的相互作用とも関連づけられており、複製ストレスや遺伝毒性ストレスに対する細胞応答に影響を及ぼします。FAM35Aの活性または発現の変化はゲノム不安定性の表現型と関連し、がん生物学やDNA修復不全状態に関わる文脈で観察されています。FAM35A関連試薬は、DNA損傷シグナル伝達の機構解析、CRISPRを用いた摂動スクリーニング、ならびにRAD51フォーカス形成、末端リセクションマーカー、複製フォーク動態のアッセイを用いた修復経路依存性のプロファイリングに役立ちます。
FAM35A ダブルニカースプラスミド（h2）は、human 細胞株における FAM35A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FAM35A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FAM35Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FAM35Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。