FAM20B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411386-ACT

FAM20B は、プロテオグリカン生合成に必須な四糖リンカー領域内のキシロース残基をリン酸化する、ゴルジ体局在のグリコサミノグリカン（GAG）キシロースキナーゼをコードします。ヘパラン硫酸およびコンドロイチン／デルマタン硫酸鎖の開始と伸長を調節することで、FAM20B は細胞外マトリックスの組織化、細胞―マトリックス接着、ならびに FGF、WNT、BMP などのシグナル伝達軸を含む増殖因子の分布に影響を与えます。プロテオグリカン／GAG の恒常性の破綻は、骨格発生の異常、結合組織の完全性低下、そして腫瘍微小環境のリモデリングに関与する細胞シグナル制御プログラムの破綻と関連しています。そのため FAM20B は、マトリックス依存的な増殖・遊走・発生形態形成を制御する経路において研究されています。

FAM20B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM20Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM20B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM20B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM20B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM20Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM20B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM20B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM20B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM20B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。