Particules Lentivirales d'Activation (h) FAM20A: sc-409969-LAC

FAM20A code une protéine sécrétée/acheminée via la voie RE–Golgi, qui agit comme une pseudokinase au sein de la famille FAM20 et module l’activité et le trafic des kinases de la voie sécrétoire, influençant la phosphorylation des protéines extracellulaires et des processus liés à la biomineralisation. Elle est impliquée dans la régulation de la formation de l’émail et de l’homéostasie minérale via ses effets sur les protéines de la matrice sécrétée et sur la maturation associée à l’appareil de Golgi. Des altérations de la fonction de FAM20A ont été associées à des phénotypes liés à l’amélogenèse et à des troubles de calcification ectopique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la biologie de la minéralisation et de la régulation de la voie sécrétoire. Dans les modèles cellulaires, FAM20A est fréquemment étudiée pour son impact sur la composition de la matrice extracellulaire, la sécrétion protéique et les réseaux de modifications post-traductionnelles.

Les particules d'activation lentivirales FAM20A (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FAM20A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales FAM20A (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FAM20A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de FAM20A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FAM20A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.