FAM177A1 CRISPR Activationプラスミド (h2): sc-417161-ACT-2

ヒトFAM177A1（family with sequence similarity 177 member A1）は、十分に特徴づけられていないタンパク質をコードする遺伝子であり、発現データや遺伝学的関連解析に基づいて、細胞の恒常性維持および免疫関連の生物学との関わりが示唆されつつある。現時点のエビデンスからは、FAM177A1が細胞内トラフィッキングやシグナル伝達プログラムに影響を与え、それによって炎症応答を形作る可能性が示されており、自然免疫経路の文脈依存的な制御を研究するうえで重要な対象となり得る。FAM177A1の多型や発現変動は複雑疾患の表現型との関連が報告されており、遺伝子—環境相互作用や下流の転写ネットワークを検証する機能ゲノミクスの標的としての有用性を支持している。ヒト細胞におけるFAM177A1の遺伝子編集は、経路間の連結性に関する機序解明、表現型スクリーニング、ならびに免疫応答やストレス応答過程に影響する候補制御エレメントの検証を可能にする。

FAM177A1 CRISPR活性化プラスミド（h2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM177A1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM177A1 CRISPR 活性化プラスミド (h2) は、ヒト細胞株における FAM177A1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM177A1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM177A1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM177A1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM177A1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM177A1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM177A1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。