FAM171A2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415352-ACT

FAM171A2（family with sequence similarity 171 member A2）は、膜関連タンパク質であると予測されているものの、性状解析が十分ではないヒトタンパク質をコードします。近年、FAM171ファミリーが細胞間相互作用や細胞形態の制御に関与することを示す証拠が蓄積しつつあります。トランスクリプトームデータセットからは、神経系および上皮系の系譜において状況依存的な発現が示唆されており、FAM171A2が分化に関連するプログラムや組織特異的なシグナル伝達状態に関与する可能性が示されています。一部のがん研究や神経生物学に焦点を当てた研究では発現パターンの変化が報告されており、FAM171A2が増殖、遊走、あるいは系譜アイデンティティの修飾因子として働く可能性を検討する価値があることを支持しています。作用機序に関する注釈が依然として限られているため、内在性FAM171A2を制御下で摂動させることは、経路間の連結性をマッピングし、下流の転写応答を定義するうえで有用です。

FAM171A2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FAM171A2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

FAM171A2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FAM171A2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFAM171A2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性FAM171A2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFAM171A2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるFAM171A2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFAM171A2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるFAM171A2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。