FAM103A1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-418204-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- FAM103A1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- FAM103A1ダブルニカースプラスミド（h）およびFAM103A1ダブルニカースプラスミド（h2）は、FAM103A1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
FAM103A1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-418204-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
FAM103A1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-418204-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
FAM103A1（family with sequence similarity 103 member A1）は、機能アノテーションが限られており十分に特徴づけられていないヒトタンパク質をコードしているため、体系的な遺伝子機能探索の対象として注目されています。利用可能な証拠からは、細胞の基本的な恒常性に関与し、未解明の相互作用ネットワークを介してRNA／タンパク質の取り扱いや細胞周期に連動した制御などの過程に影響している可能性が示唆されます。機能未知の遺伝子は状況依存的な表現型に寄与し得るため、FAM103A1はゲノムスケールの摂動データセットにおいて、増殖、ストレス応答、系統特異的な依存性への影響が評価されることが多いです。FAM103A1の活性を定義することは、臨床的有用性を示唆するものではないものの、疾患関連の細胞状態で破綻し得る経路の理解に役立ちます。
FAM103A1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FAM103A1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FAM103A1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FAM103A1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FAM103A1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。