FAK Double Nickaseプラスミド (m): sc-420280-NIC

マウスPtk2は、焦点接着キナーゼ（FAK）をコードする受容体非依存性チロシンキナーゼであり、インテグリンおよび増殖因子シグナルを統合して、焦点接着のターンオーバー、アクチン細胞骨格の再構築、ならびにメカノトランスダクションを協調的に制御します。FAKのリン酸化依存的な足場（スキャフォールド）機能は、細胞外マトリックスへの結合をPI3K–AKT、MAPK/ERK、RhoファミリーGTPaseシグナル伝達などの下流経路へと結び付け、その結果、細胞移動、生存、増殖を調節します。in vivoおよび細胞モデルでは、FAK活性の変化が接着ダイナミクスの異常、浸潤性の挙動、線維化・炎症性リモデリングと関連することが示されており、Ptk2は腫瘍微小環境における相互作用や組織恒常性の研究における重要な結節点となっています。

FAK ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Ptk2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Ptk2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Ptk2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Ptk2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。