FADD Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400580-ACT

A FADD humana (proteína associada a Fas com domínio de morte) é uma molécula adaptadora que transduz sinais de receptores de morte, incluindo FAS e membros da família TNFRSF, para iniciar a apoptose extrínseca. Ao fazer a ponte entre complexos de receptores e caspases iniciadoras, como a CASP8, por meio de interações homotípicas do domínio de morte, a FADD regula a ativação da cascata de caspases, a morte celular programada e a homeostase imunológica. Além da apoptose, a FADD influencia a sinalização de NF-κB, respostas inflamatórias e o controle do ciclo celular de maneira dependente do contexto. A desregulação da sinalização mediada por FADD tem sido implicada em alterações na competência apoptótica e em disfunções imunes observadas em diversos modelos de câncer e doenças inflamatórias.

FADD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FADD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FADD O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FADD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FADD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FADD. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FADD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FADD no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FADD em células tumorais com expressão de FADD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.