Factor IX Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402469-ACT

O gene humano F9 codifica o Fator IX da coagulação, um zimogênio de serina protease dependente de vitamina K, produzido principalmente em hepatócitos e secretado no plasma como um componente-chave da via intrínseca da cascata de coagulação. Após a ativação para Fator IXa, ele se associa ao Fator VIIIa em superfícies fosfolipídicas para formar o complexo tenase intrínseco, catalisando a ativação do Fator X e propagando a geração de trombina. A atividade de F9 é regulada por γ-carboxilação pós-traducional e por ligação à membrana dependente de cálcio, que integram vias biossintéticas hepáticas com a sinalização hemostática. Alterações genéticas ou funcionais em F9 estão fortemente associadas a distúrbios de coagulação, tornando-o um locus amplamente utilizado para estudar a regulação gênica no fígado, a maturação de proteases secretadas e o controle, em nível de via, da coagulação.

Factor IX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de F9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Factor IX O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus F9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição F9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Factor IX. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus F9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Factor IX no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Factor IX em células tumorais com expressão de F9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.