EYA1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-404056-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- EYA1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- EYA1ダブルニカースプラスミド（h）およびEYA1ダブルニカースプラスミド（h2）は、EYA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
EYA1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-404056-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EYA1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-404056-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EYA1 は Eyes Absent Homolog 1 をコードしており、SIX および DACH ファミリータンパク質との相互作用を介して発生関連の遺伝子プログラムを調節する、転写共役因子かつ二重特異性ホスファターゼです。EYA1 は器官形成に関わるシグナル伝達ネットワークに寄与し、上皮分化や前駆細胞の維持を制御する経路において、リン酸化依存的な転写制御と細胞運命決定を統合します。EYA1 機能の異常は、頭蓋顔面・聴覚・腎臓の発生に影響する先天性疾患と関連しており、発現変動は腫瘍進展や細胞可塑性の文脈でも検討されています。これらの特徴により、EYA1 は転写回路、発生生物学、ならびにホスファターゼ制御下の遺伝子発現を研究するうえで有用な標的となります。
EYA1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EYA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EYA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EYA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EYA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。