EY-cadherin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401988-ACT

CDH18 codifica a EY-caderina, uma molécula de adesão célula–célula dependente de cálcio da superfamília das caderinas, que sustenta a arquitetura dos tecidos ao promover a formação de junções aderentes e a triagem coordenada de células. Por meio da ligação às cateninas e ao citoesqueleto de actina, a EY-caderina pode influenciar a inibição por contato, programas de coesão do tipo epitelial e redes de sinalização que se cruzam com a dinâmica da β-catenina e outros reguladores juncionais. A expressão alterada ou a adesão mediada por caderinas desregulada está associada a mudanças na migração celular, no estado de diferenciação e no comportamento invasivo observados em diversos contextos de doença. Como resultado, CDH18 é frequentemente estudado em modelos que investigam sinalização dependente de adesão, morfogênese e transições de identidade celular.

EY-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CDH18 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

EY-cadherin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CDH18 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CDH18, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de EY-cadherin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CDH18 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de EY-cadherin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via EY-cadherin em células tumorais com expressão de CDH18 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.