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EY-cadherinCRISPR激活质粒(h) | sc-401988-ACT | 20 µg | $397.00 |
CDH18 编码 EY-钙黏蛋白(EY-cadherin),它属于钙依赖性的细胞—细胞黏附分子,为钙黏蛋白超家族成员,可通过促进黏着连接(adherens junction)的形成以及协调的细胞分选来维持组织结构。借助与连环蛋白(catenins)及肌动蛋白细胞骨架的连接,EY-钙黏蛋白能够影响接触抑制、类似上皮的细胞凝聚程序,以及与 β-连环蛋白动态和其他连接调控因子相交汇的信号网络。EY-钙黏蛋白表达改变或钙黏蛋白介导的黏附失调,与多种疾病背景下观察到的细胞迁移、分化状态及侵袭行为变化相关。因此,CDH18 常被用于研究黏附依赖性信号传导、形态发生以及细胞身份转换的模型中。
EY-cadherin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CDH18的表达。
EY-cadherin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的CDH18基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于CDH18转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性EY-cadherin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的CDH18位点,并能够研究内源性位点上依赖于EY-cadherin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CDH18表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟EY-cadherin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。