Exportin 5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403402-ACT

XPO5はExportin 5（エクスポーチン5）をコードしており、RanGTP依存性の核外輸送受容体として、pre-miRNAや一部の構造化RNAを核から細胞質へシャトル輸送し、その後のDICERによるプロセシングおよびRNA誘導サイレンシング複合体（RISC）の形成を可能にします。Exportin 5は、細胞質のmiRNA生合成経路へ供給されるpre-miRNA量を制御することで、転写後遺伝子制御、細胞分化プログラム、ストレス応答、増殖に影響を与えます。XPO5の発現や輸送活性が攪乱されると、全体的なmiRNAプロファイルや下流の転写ネットワークが再編され得るため、がん化シグナル、転移関連表現型、ゲノム安定性に関する研究において重要です。さらにExportin 5は、Ranサイクルによって統御されるより広範な核—細胞質間輸送過程とも連関し、RNAトラフィッキングを核内構造や遺伝子発現の恒常性と結び付けています。

Exportin 5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性XPO5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Exportin 5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における XPO5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はXPO5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Exportin 5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のXPO5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるExportin 5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびXPO5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるExportin 5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。