ETEACRISPR激活质粒(h): sc-403730-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- ETEA CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- ETEA CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 ETEA CRISPR 激活质粒 (h) 和 ETEA CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 FAF2 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：ETEA: sc-374098，通过WB, IF或者IHC分析
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ETEACRISPR激活质粒(h) | sc-403730-ACT | 20 µg | $397.00 |
FAF2 编码一种定位于内质网的蛋白 ETEA（又称 UBXD8）。ETEA 是一种含 UBX 结构域的适配蛋白，可将被泛素化的底物连接到 p97/VCP ATP 酶，从而支持内质网相关降解（ERAD）与蛋白质稳态维持。通过协调错误折叠或受调控的内质网蛋白的抽提与周转，ETEA 参与未折叠蛋白反应（UPR）的耦联、脂滴组织以及代谢稳态。FAF2/ETEA 的活性与泛素–蛋白酶体通路以及内质网–脂滴接触动态相互交织，从而影响细胞对压力的耐受性。ERAD 与脂质代谢调控的异常已与蛋白毒性压力状态和代谢功能障碍相关，因此 FAF2 是在这些背景下开展机制研究的一个有用节点。
ETEA CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性FAF2的表达。
ETEA CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的FAF2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于FAF2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性ETEA表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的FAF2位点，并能够研究内源性位点上依赖于ETEA的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在FAF2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ETEA通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。