ETAR CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401000-ACT

EDNRA はエンドセリン受容体A型（ETAR）をコードする遺伝子であり、エンドセリン-1に優先的に結合するGタンパク質共役受容体（GPCR）として、血管収縮および血管平滑筋トーヌスの調節に関与します。ETARシグナルは主にGq/11を介してホスホリパーゼCを活性化し、細胞内Ca2+濃度を上昇させ、PKC依存性経路を刺激します。さらに下流ではMAPK/ERKやRho/ROCKに作用し、収縮、増殖、細胞外マトリックスのリモデリングに影響を及ぼします。内皮細胞および間質（ストローマ）環境においては、EDNRA活性は低酸素や炎症性シグナルと交差し、血管新生や線維化反応を形作る要因となります。EDNRAの発現またはシグナル伝達の異常は、心血管系および肺血管のリモデリング、全身性高血圧、ならびに腫瘍関連ストローマの生物学と関連づけられており、経路に焦点を当てた研究における機序解明の標的としての有用性が支持されています。

ETAR CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EDNRAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ETAR CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EDNRA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEDNRA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ETARの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEDNRA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるETAR依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEDNRA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるETAR経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。