ESAM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413872-ACT

内皮細胞選択的接着分子（ESAM）は、免疫グロブリンスーパーファミリーに属する膜タンパク質で、内皮細胞のタイトジャンクションに豊富に局在し、細胞間接着、血管バリアの完全性、ならびに白血球の経内皮移行を支えます。ESAMは他の内皮接着複合体と協調して、ジャンクションの組織化や細胞骨格の制御に関与し、血管新生に伴うリモデリングや炎症時の細胞トラフィッキングに影響を与えます。ESAM発現の変化は、血管機能障害、腫瘍関連血管新生、そして内皮透過性や免疫細胞浸潤の制御が破綻する炎症性疾患の状況と関連づけられています。ジャンクションのマーカーであり機能調節因子でもあるESAMは、内皮分化の研究、血管透過性アッセイ、微小環境に駆動される炎症モデルなどで広く解析されています。

ESAM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ESAMの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ESAM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ESAM 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はESAM転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ESAMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のESAM遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるESAM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびESAM発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるESAM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。