Erythropoietin/EPO Double Nickaseプラスミド (h): sc-400283-NIC

ヒトEPOはエリスロポエチンをコードしており、これは分泌型の糖タンパク質ホルモンで、EPORへの結合および下流のJAK2/STAT5シグナル伝達を介して、赤芽球系前駆細胞の生存・増殖・分化を調節する。この経路はPI3K–AKTやMAPKカスケードとも統合され、HIF因子による転写制御を含む低酸素ストレス下で、抗アポトーシスプログラムと造血出力を協調的に制御する。造血以外の文脈でも、EPO/EPORシグナルはサイトカイン受容体生物学、ストレス応答性の転写ネットワーク、ならびに細胞間クロストークにおける分泌因子の動態を解析するためのモデルとして用いられている。EPOの発現やシグナル伝達の異常は、貧血の生物学、低酸素に伴うリモデリング、そして酸素感知経路が攪乱された腫瘍微小環境における適応の観点から、しばしば研究対象となる。

Erythropoietin/EPO ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPO 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPO内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPOの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPOが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。