ERp57 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420698

概要

Pdia3はERp57（PDIA3/GRP58とも呼ばれる）をコードしており、ERp57は小胞体内腔に存在するチオール‐ジスルフィド酸化還元酵素である。ERp57はカルネキシンおよびカルレティキュリンと協調して、新生糖タンパク質の酸化的フォールディングと品質管理を促進する。ERp57はジスルフィド結合形成を通じて小胞体プロテオスタシスを支え、アンフォールドタンパク質応答（UPR）シグナル、小胞体関連分解（ERAD）、およびレドックス恒常性と密接に関連している。さらに小胞体内腔にとどまらず、PDIA3はMHCクラスIにおけるペプチドローディングを介した抗原提示や、細胞ストレス適応に関わるシグナル伝達経路の調節にも関与することが示唆されている。PDIA3/ERp57活性の破綻は、神経変性疾患や代謝性疾患モデルなど、プロテオトキシックストレスおよび酸化ストレスを特徴とする病態と関連しており、小胞体ストレスや免疫関連プロセスの機構研究において重要である。

ERp57 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPdia3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Pdia3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Pdia3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ERp57タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ERp57シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Pdia3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ERp57の機能に不可欠なPdia3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Pdia3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ERp57 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびERp57 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Pdia3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ERp57 HDRプラスミド（m）および ERp57 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPdia3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPdia3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。