Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ERp57 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420698
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ERp57 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ERp57, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ERp57 Antibody (MaP.ERp57): sc-23886
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ERp57 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-420698 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Pdia3 codifica ERp57 (noto anche come PDIA3/GRP58), un ossidoreduttasi tiolo–disolfuro del reticolo endoplasmatico che interagisce con calnexina e calreticulina per favorire il ripiegamento ossidativo e il controllo qualità delle glicoproteine nascenti. ERp57 sostiene la proteostasi del RE attraverso la formazione di ponti disolfuro ed è strettamente collegato alla segnalazione della risposta alle proteine mal ripiegate (UPR), alla degradazione associata al RE (ERAD) e all’omeostasi redox. Al di fuori del lume del RE, PDIA3 è stato implicato nella presentazione dell’antigene tramite il caricamento dei peptidi su MHC di classe I e nella modulazione di vie di segnalazione connesse all’adattamento cellulare allo stress. La disregolazione dell’attività di PDIA3/ERp57 è associata a condizioni caratterizzate da stress proteotossico e ossidativo, inclusi modelli di malattie neurodegenerative e metaboliche, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sullo stress del RE e sui processi immuno-correlati.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ERp57 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pdia3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pdia3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pdia3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ERp57.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pdia3 per lo studio della segnalazione di ERp57, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Pdia3 critici per la funzione di ERp57
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pdia3 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ERp57 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pdia3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ERp57 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ERp57 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pdia3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pdia3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.