ERK 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400010-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ERK 1O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ERK 1 (h) e o Plasmídeo Double Nickase ERK 1 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para MAPK3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ERK 1 Anticorpo (G-8): sc-271269
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ERK 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400010-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ERK 1 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400010-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MAPK3 codifica a ERK1, uma quinase de serina/treonina que atua como um efetor central da cascata de sinalização RAS–RAF–MEK–ERK (MAPK). Após a ativação por fosforilação dependente de MEK, a ERK1 transloca-se para o núcleo e fosforila fatores de transcrição e outros substratos para controlar a proliferação, a diferenciação, a progressão do ciclo celular e as respostas ao estresse. A atividade da ERK1 também integra sinais de recetores de fatores de crescimento e de vias de GPCR, modulando a expressão de genes de resposta imediata e a regulação por feedback dentro das redes MAPK. A desregulação da sinalização MAPK3/ERK1 tem sido associada à sinalização oncogénica, à biologia inflamatória e a processos do neurodesenvolvimento, tornando-a amplamente relevante para estudos mecanísticos de reprogramação de sinalização e de fenótipos celulares.
ERK 1 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MAPK3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MAPK3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MAPK3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MAPK3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.