ERK 1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400010-ACT

MAPK3は細胞外シグナル制御キナーゼ1（ERK1）をコードする遺伝子であり、RAS–RAF–MEK–ERKからなるMAPKカスケードの中核的な実行因子として機能するセリン／スレオニンキナーゼです。ERK1は増殖因子、サイトカイン、ストレス刺激からのシグナルを伝達し、核内および細胞質の基質をリン酸化することで、増殖、分化、代謝、細胞生存を制御する転写プログラムを調節します。この経路は、細胞周期の進行、即時早期遺伝子の発現、ならびに上流の受容体やキナーゼに対するフィードバック制御を協調的に統合します。ERKシグナルの破綻は、がん化シグナルネットワークや炎症性／神経生物学的表現型にしばしば関与するため、MAPK3は経路のリワイヤリング機構や状況依存的なシグナル出力を検討するメカニスティック研究における共通の結節点となっています。

ERK 1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MAPK3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ERK 1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MAPK3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMAPK3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ERK 1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMAPK3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるERK 1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMAPK3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるERK 1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。