ErbB4/HER4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400275-ACT

ERBB4 codifica a tirosina quinase receptora ErbB4/HER4, um membro da família EGFR/ErbB que transduz sinais extracelulares de neuregulinas e ligantes relacionados. Após a ativação, o ErbB4 participa da dimerização do receptor e da autofosforilação, propagando a sinalização pelas vias MAPK/ERK, PI3K/AKT, JAK/STAT e PLCγ para regular proliferação, diferenciação, migração e sobrevivência. O ERBB4 é amplamente estudado em contextos de desenvolvimento e homeostase tecidual, incluindo programas de sinalização neurais e epiteliais, e sua desregulação tem sido associada a redes de sinalização oncogênica e a alterações no controle do destino celular. Essas conexões de vias tornam o ERBB4 um nó útil para investigar a comunicação cruzada entre receptores, a regulação por feedback e saídas de sinalização dependentes do contexto em células humanas.

ErbB4/HER4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERBB4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ErbB4/HER4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERBB4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERBB4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ErbB4/HER4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERBB4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ErbB4/HER4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ErbB4/HER4 em células tumorais com expressão de ERBB4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.