ErbB2/HER2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400138-ACT

ERBB2 codifica a ErbB2/HER2, um membro da família de receptores tirosina-quinase ERBB que atua como parceiro preferencial de heterodimerização de EGFR/ERBB3 e amplifica a sinalização induzida por ligantes. Dímeros contendo HER2 ativam as cascatas PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, ligando estímulos extracelulares à proliferação, sobrevivência, remodelação metabólica e progressão do ciclo celular. A expressão desregulada ou o aumento do número de cópias de ERBB2 pode perturbar o tráfego do receptor e o controle por feedback, alterando os limiares de sinalização da rede e modificando programas transcricionais. Consequentemente, ERBB2 é amplamente estudado na biologia da sinalização oncogênica, no crosstalk entre receptores e nos mecanismos de dependência de vias em modelos de doença humana.

ErbB2/HER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ERBB2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ErbB2/HER2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ERBB2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ERBB2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ErbB2/HER2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ERBB2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ErbB2/HER2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ErbB2/HER2 em células tumorais com expressão de ERBB2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.