EpoR CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420210

概要

Eporはエリスロポエチン受容体（EpoR）をコードしており、マウスの造血において赤芽球系前駆細胞の生存・増殖・分化に必須なI型サイトカイン受容体である。リガンド結合によって受容体が二量体化するとJAK2が活性化され、下流のSTAT5シグナル伝達が誘導される。さらに、抗アポトーシスおよび細胞周期プログラムを制御するPI3K–AKT経路やMAPK/ERK経路とも連動する。EpoRの活性は、低酸素により誘導されるエリスロポエチンシグナルへの応答を規定し、骨髄および脾臓におけるより広範なサイトカインネットワークとも統合される。EPOR経路シグナルの異常は、赤血球生成の欠陥、サイトカイン受容体シグナルの攪乱、ならびに貧血や赤芽球系の過増殖表現型に関連するストレス赤血球生成機構の研究モデルとして広く用いられている。

EpoR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEpor遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Epor内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eporのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、EpoRタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、EpoRシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Epor欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• EpoRの機能に不可欠なEporエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eporゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• EpoR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびEpoR CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Epor遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  EpoR HDRプラスミド（m）および EpoR HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEporホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEpor標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。