EpoR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420210

Panoramica

Epor codifica il recettore dell’eritropoietina (EpoR), un recettore di citochine di tipo I essenziale per la sopravvivenza, la proliferazione e la differenziazione dei progenitori eritroidi nell’ematopoiesi murina. La dimerizzazione del recettore indotta dal ligando attiva JAK2 e la segnalazione a valle di STAT5, con un ulteriore accoppiamento alle vie PI3K–AKT e MAPK/ERK che regolano programmi anti-apoptotici e del ciclo cellulare. L’attività di EpoR modella le risposte alla segnalazione dell’eritropoietina indotta dall’ipossia e si integra con reti più ampie di citochine nel midollo osseo e nella milza. La deregolazione della segnalazione della via EPOR è ampiamente utilizzata come modello per studiare difetti dell’eritropoiesi, alterazioni della segnalazione dei recettori delle citochine e meccanismi di eritropoiesi da stress rilevanti per l’anemia e per fenotipi di iperproliferazione eritroide.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO EpoR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Epor in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Epor insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Epor a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina EpoR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Epor per lo studio della segnalazione di EpoR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Epor critici per la funzione di EpoR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Epor per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal EpoR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal EpoR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Epor. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal EpoR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR EpoR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Epor per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Epor definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.