Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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EPHX2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402095-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- sEH Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- sEHダブルニカースプラスミド（h）およびsEHダブルニカースプラスミド（h2）は、EPHX2を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: sEH 抗体 (A-5): sc-166961
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
EPHX2 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402095-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
sEH Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402095-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHX2 は可溶性エポキシド加水分解酵素（sEH）をコードしており、これは多価不飽和脂肪酸に由来する脂質エポキシドを対応するジオールへ変換する二機能性酵素です。これにより、エポキシエイコサトリエン酸（EET）および関連するエポキシ脂肪酸のバランスが調節されます。このエポキシド加水分解の段階を介して、EPHX2 は血管緊張の制御、炎症シグナル、酸化ストレス応答、細胞代謝を調節するエイコサノイド／オキシリピンのシグナル伝達経路に影響を与えます。EPHX2 活性やオキシリピンプロファイルの変化は、高血圧、インスリン抵抗性、動脈硬化関連過程などの心血管・代謝表現型に加え、神経炎症や疼痛関連シグナルとも関連づけられています。生物医学研究において EPXH2 は、脂質メディエーター生物学、内皮細胞および免疫細胞機能、ならびに代謝入力を炎症出力へ結びつけるストレス応答経路の文脈で広く研究されています。
sEH ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPHX2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPHX2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPHX2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPHX2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。