EphB4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401122-ACT

EPHB4 は EphB4（受容体型チロシンキナーゼ）をコードしており、膜結合型の ephrin-B リガンドに結合して、胚発生期の血管形成、静脈の運命決定、ならびに組織パターニングにおける接触依存的なシグナル伝達を仲介します。EphB4 の活性は、受容体のクラスター形成、自己リン酸化、および Rho ファミリー GTPase、MAPK/ERK、PI3K/AKT、Src/FAK シグナル伝達などの下流経路を調節し、これらが協調して内皮細胞の遊走、細胞接着、境界形成を制御します。成体組織では、EphB4 シグナルは血管新生に伴うリモデリングや血管周囲の相互作用に寄与し、その破綻は複数の腫瘍環境や血管異常で報告されています。細胞間コミュニケーションと細胞骨格ダイナミクスを結ぶ経路の要所として、EPHB4 は血管新生、浸潤、微小環境におけるクロストークのモデルで頻繁に研究されています。

EphB4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPHB4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EphB4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPHB4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPHB4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EphB4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPHB4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEphB4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPHB4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEphB4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。