EphA7 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-420197-ACT

マウスEpha7は、エフリンA/Ephシグナル伝達軸に属する受容体型チロシンキナーゼであるEphA7をコードしており、接触依存的な細胞間コミュニケーションを介して、細胞の位置決め、接着、反発性ガイダンスを制御します。EphA7シグナルはRhoファミリーGTPアーゼを介した細胞骨格リモデリングを協調させ、さらにMAPK/ERK経路やPI3K関連経路と統合されることで、状況依存的に増殖・分化・生存に影響を与えます。神経系では、EphA7は発生期の軸索ガイダンス、神経回路の結合性、境界形成に寄与し、上皮および間葉系組織の構築における役割も報告されています。EphA7活性の制御異常は発生パターン形成の変化と関連づけられており、腫瘍細胞の遊走・浸潤や異常な増殖制御など、疾患に関連するプロセスにおいても検討されています。

EphA7 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Epha7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EphA7 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Epha7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEpha7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EphA7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEpha7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEphA7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEpha7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEphA7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。