EphA4 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400729-NIC

EPHA4は、軸索誘導、シナプス可塑性、組織境界の形成に重要な、接触依存的シグナル伝達を担うEph/ephrinファミリーの受容体型チロシンキナーゼであるEphA4をコードします。エフリンリガンドの結合により、EphA4は双方向性シグナル伝達を引き起こし、RhoファミリーGTPアーゼ、MAPKカスケード、PI3K関連シグナルなどの経路を介して、細胞骨格の再編成、細胞接着、遊走を調節します。ヒトの生物学においては、EphA4シグナルの変調が、神経発達および神経変性の文脈に関連する神経回路形成の異常や、異常な細胞運動プログラムと関連づけられており、さらにがんモデルでは浸潤関連の表現型とも関連が示されています。これらの特性により、EPHA4は受容体型チロシンキナーゼ間のクロストーク、リガンド依存的なシグナル伝達ダイナミクス、ならびに細胞間コミュニケーション機構を研究するうえで有用なノードとなります。

EphA4 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPHA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPHA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPHA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPHA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。