EphA4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400729-ACT

EPHA4は、軸索誘導、シナプス形成、細胞移動を制御する接触依存性シグナル伝達を仲介するEph/ephrinファミリーの受容体型チロシンキナーゼであるEphA4をコードしています。EphA4の活性化は、RhoファミリーGTPaseシグナル、MAPK経路、ならびに細胞骨格の再編成を介して、発生期および成体組織における接着や境界形成を制御します。ヒトの生物学において、EPHA4シグナルの変化は神経発達および神経変性の表現型と関連づけられており、Eph受容体活性の破綻は腫瘍細胞の浸潤や血管新生シグナルの観点からもしばしば研究されています。これらの機能により、EPHA4は神経回路の連結性、組織パターニング、受容体駆動型シグナル伝達ネットワークの機構研究に有用な標的となります。

EphA4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EPHA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

EphA4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EPHA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEPHA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性EphA4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEPHA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるEphA4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEPHA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるEphA4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。