EphA3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401565-NIC

EPHA3は、細胞間コミュニケーション、組織のパターニング、ならびに細胞骨格の再構築を制御するエフリンAシグナル伝達ネットワークに属する受容体型チロシンキナーゼであるEphA3をコードする。エフリンが結合すると、EphA3は双方向性シグナル伝達に影響を与え、RhoファミリーGTPアーゼ、MAPK、PI3K関連経路と交差しながら、細胞接着、遊走、境界形成を調節する。EPHA3の発現やシグナル伝達の制御破綻は、発生プログラムの変化や、複数のがんにおける異常な増殖・浸潤表現型と関連づけられており、受容体駆動のガイダンスや腫瘍微小環境相互作用を研究するうえで有用な標的（ノード）となる。ヒト細胞モデルでは、EphA3依存的シグナル伝達は、接触依存的なシグナル動態と下流の転写応答を検討するための扱いやすい系を提供する。

EphA3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPHA3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPHA3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPHA3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPHA3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。