Partículas Lentivirales de Activación (h) EphA2: sc-400535-LAC

EPHA2 codifica EphA2, una tirosina cinasa receptora de la familia de receptores de efrina que media la señalización dependiente de contacto en contextos epiteliales y endoteliales. EphA2 regula la adhesión celular, la polaridad, la migración y la proliferación mediante interacciones bidireccionales con efrina‑A y vías de señalización aguas abajo que incluyen las GTPasas de la familia Rho, MAPK/ERK, PI3K/AKT y la señalización de adhesiones focales. La perturbación de la señalización de EphA2 se ha vinculado con alteraciones de la arquitectura tisular, respuestas angiogénicas y fenotipos invasivos, lo que convierte a EPHA2 en un nodo estudiado con frecuencia en biología del cáncer y en la remodelación asociada a la metástasis. La actividad de EPHA2 también se investiga en el contexto del patrón de desarrollo y la función de barrera, donde la señalización dependiente de ligando frente a la independiente de ligando puede producir resultados celulares distintos.

Las partículas de activación lentiviral EphA2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de EPHA2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral EphA2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción EPHA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de EphA2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo EPHA2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.