Plásmido CRISPR de Activación (h) EphA2: sc-400535-ACT

EPHA2 codifica EphA2, una tirosina quinasa receptora de la familia de las efrinas que media señalización dependiente del contacto para coordinar la comunicación célula–célula, la remodelación del citoesqueleto y la formación de límites tisulares. Tras la unión de ligandos ephrin-A, EphA2 influye en cascadas posteriores que incluyen las GTPasas de la familia Rho, MAPK/ERK, PI3K/AKT y la dinámica de las adhesiones focales, moldeando programas de adhesión, migración y proliferación. En contextos epiteliales y endoteliales, EphA2 contribuye a la morfogénesis y a la organización de la barrera, y su desregulación se estudia con frecuencia en relación con la señalización oncogénica, fenotipos asociados a la invasión y respuestas angiogénicas alteradas. Como receptor de superficie que integra señales del microambiente, EPHA2 sirve como un nodo manejable para desentrañar redes de señalización impulsadas por receptores y el diálogo cruzado entre vías próximas a la membrana.

EphA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de EPHA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

EphA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus EPHA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional EPHA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de EphA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo EPHA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de EphA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía EphA2 en células tumorales con expresión de EPHA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.