Eos Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402330-ACT

IKZF4 (Eos) é um fator de transcrição do tipo “dedo de zinco” da família Ikaros que atua como regulador dependente do contexto da expressão gênica em linhagens hematopoéticas, com papéis de destaque na diferenciação de células T e na homeostase imunológica. Eos participa do remodelamento da cromatina e de programas de repressão/ativação transcricional que moldam as saídas de sinalização de citocinas e redes transcricionais específicas de linhagem. Por meio de interações com complexos corre regulatórios, o IKZF4 ajuda a coordenar decisões de destino celular, limiares de ativação e a manutenção de fenótipos regulatórios. A atividade desregulada do IKZF4 e padrões de expressão alterados têm sido implicados na patobiologia mediada pelo sistema imune e são estudados por suas contribuições para a sinalização inflamatória e para estados transcricionais associados a doenças hematológicas.

Eos O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IKZF4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Eos O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IKZF4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IKZF4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Eos. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IKZF4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Eos no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Eos em células tumorais com expressão de IKZF4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.