ENT4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-405115-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ENT4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase ENT4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase ENT4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para SLC29A4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ENT4 Anticorpo (SA-18): sc-101295
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ENT4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-405115-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ENT4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-405115-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O SLC29A4 humano codifica o transportador equilibrativo de nucleosídeos 4 (ENT4), um membro da família SLC29 que medeia o transporte bidirecional de nucleosídeos e de cátions orgânicos relacionados através das membranas celulares, de acordo com os gradientes de concentração. A atividade do ENT4 contribui para a via de salvamento de nucleosídeos e para o metabolismo de purinas, influenciando os “pools” intracelulares de nucleotídeos e, assim, conectando o transporte de membrana à síntese de DNA/RNA e à homeostase metabólica mais ampla. O transporte mediado por ENT4 é sensível às condições extracelulares e pode se cruzar com respostas celulares ao estresse que remodelam a demanda por nucleotídeos e a sinalização. Alterações na função de SLC29A4/ENT4 têm sido investigadas no contexto de desregulação do manejo de nucleosídeos e de fenótipos impulsionados por metabólitos, relevantes para pesquisas em doenças neurológicas e metabólicas.
ENT4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SLC29A4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SLC29A4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SLC29A4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SLC29A4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.