ENHO CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418381-ACT

ENHOは、ペプチドホルモンであるアドロピンをコードしており、全身のエネルギーホメオスタシスおよび心代謝調節に関与する分泌因子として示唆されています。ENHOの発現は栄養感知や代謝適応と関連づけられており、グルコースおよび脂質の利用や、肝代謝・血管機能・骨格筋生理を協調させるシグナル伝達プログラムに影響を与えます。細胞モデルでは、アドロピンに関連する作用がミトコンドリア機能、酸化ストレス応答、内皮シグナリングを制御する経路と交差しており、ENHOは代謝リプログラミングを研究するうえで有用な結節点となります。ENHO／アドロピン量の変化は、肥満、インスリン抵抗性、脂肪肝疾患、心血管機能障害に関連する状況で報告されており、臨床的な推論ではなく機序解明研究における重要性を裏づけています。

ENHO CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ENHOの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ENHO CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ENHO 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はENHO転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ENHOの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のENHO遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるENHO依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびENHO発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるENHO経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。