ENC1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420175

Panoramica

ENC1 (ectodermal-neural cortex 1) codifica una proteina contenente ripetizioni kelch che funge da adattatore associato all’actina, coinvolto nell’organizzazione del citoscheletro e nei programmi di differenziamento cellulare. Nei tessuti murini, l’espressione di ENC1 è arricchita nelle linee neurali e in altre linee in differenziamento, dove è stata collegata alla modulazione delle risposte allo stress ossidativo e dell’omeostasi proteica. Interazioni riportate e associazioni di via collocano ENC1 in processi che regolano i cambiamenti della forma cellulare, la crescita dei neuriti e il turnover regolato delle proteine associate al citoscheletro, inclusa la comunicazione con meccanismi dipendenti dall’ubiquitina. Un’espressione deregolata di ENC1 è stata osservata in contesti di alterazioni del neurosviluppo e di biologia tumorale, supportandone l’uso come strumento molecolare per studiare lo stato di differenziamento e la segnalazione adattativa allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ENC1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Enc1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Enc1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Enc1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ENC1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Enc1 per lo studio della segnalazione di ENC1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Enc1 critici per la funzione di ENC1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Enc1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ENC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ENC1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Enc1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ENC1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ENC1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Enc1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Enc1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.