EN2/Engrailed 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403598-NIC

EN2（Engrailed 2）はホメオボックスを含む転写因子で、ヒトの発生過程において空間的パターニングや神経細胞の分化を制御し、とりわけ中脳―後脳領域の規定および小脳回路の形成に重要な役割を担います。EN2はホメオドメインを介してDNAに結合し、細胞運命の決定、軸索誘導、シナプス構造の形成に影響する遺伝子発現プログラムを協調的に制御します。EN2の活性はWNT、FGF、SHHなどの発生シグナルネットワークと連携して、領域アイデンティティや神経新生のタイミングを精緻化します。EN2の発現異常や制御環境の変化は神経発達に関わる表現型と関連づけられており、神経系譜の規定や転写ネットワークの安定性に関する研究で頻繁に解析対象となっています。

EN2/Engrailed 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。