emerin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401048-ACT

ヒトのEMDは、LEMドメインをもつ内核膜タンパク質であるエメリンをコードしており、ラミン、BAF、およびLINC関連成分との相互作用を介して核ラミナを固定し、核を細胞骨格由来の力と結び付ける。エメリンは核膜の組織化、メカノトランスダクション、ならびにクロマチンの係留に寄与し、転写制御、DNA損傷応答、細胞周期の進行に影響を与える。エメリン依存的な核構造の撹乱は、横紋筋や心臓伝導系における組織特異的な病態と関連しており、EMDは核膜関連疾患の生物学を研究するうえで広く用いられるモデルである。核周辺の足場因子として、エメリンは核の剛性、ゲノム安定性、分化依存的な遺伝子発現プログラムを制御する経路において、しばしば研究対象となっている。

emerin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EMDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

emerin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EMD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEMD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性emerinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEMD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるemerin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEMD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるemerin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。