ELOVL6 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413125-ACT

ELOVL6（超長鎖脂肪酸伸長酵素6）は小胞体に局在するミクロソームの脂肪酸伸長酵素で、飽和および一価不飽和のC12～C16脂肪酸を伸長し、小胞体内でステアリン酸（C18:0）などのより長鎖の脂肪酸種へと変換します。細胞内の長鎖アシルCoAプールを形成することで、ELOVL6はde novo脂質合成、膜脂質組成、ならびに下流のグリセロ脂質およびスフィンゴ脂質の生合成に影響を与えます。ELOVL6活性は、SREBP1に駆動される転写プログラムや、脂質を介したストレス応答などの代謝シグナルネットワークとも交差し、インスリン感受性や炎症の調節に関与します。ELOVL6発現の変化は、肝脂肪化、肥満に関連するインスリン抵抗性、心代謝リスク状態などの代謝疾患表現型でみられる脂質恒常性の破綻と関連づけられています。

ELOVL6 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELOVL6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

ELOVL6 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELOVL6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELOVL6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性ELOVL6の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELOVL6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるELOVL6依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELOVL6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるELOVL6経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。