Plásmido Doble Nickase (h) ELOVL5: sc-417429-NIC

ELOVL5 codifica una elongasa que cataliza la extensión de ácidos grasos poliinsaturados de cadena larga a ácidos grasos de cadena muy larga, lo que respalda la síntesis de lípidos de membrana y de mediadores de señalización derivados de lípidos. Actúa en el metabolismo lipídico del retículo endoplásmico y se conecta con vías que regulan la remodelación de fosfolípidos, la disponibilidad de precursores de eicosanoides y docosanoides, y las respuestas de estrés celular vinculadas a la composición de la membrana. La alteración de la actividad de ELOVL5 se ha asociado con una homeostasis lipídica desregulada en contextos metabólicos e inflamatorios, y se ha implicado en fenotipos neurodegenerativos en los que la composición de ácidos grasos influye en la función neuronal. En consecuencia, ELOVL5 se estudia ampliamente en biología de sistemas del metabolismo de lípidos, la dinámica de membranas y la investigación de mecanismos basada en lipidómica.

ELOVL5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ELOVL5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ELOVL5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ELOVL5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ELOVL5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.