Plásmido CRISPR de Activación (h) Elongin B: sc-402154-ACT

ELOB codifica la proteína humana Elongin B, un componente central del complejo Elongin BC que estabiliza proteínas adaptadoras con caja SOCS y similares a VHL, y favorece el ensamblaje de ligasas E3 de ubiquitina tipo Cullin-RING. A través de estos complejos, Elongin B contribuye a la proteostasis dependiente de ubiquitina y a la regulación de programas transcripcionales vinculados a la elongación de la ARN polimerasa II y a las vías de detección de oxígeno. Los ensamblajes de ligasas asociados a ELOB influyen en el recambio de reguladores clave de la señalización y del ciclo celular, conectando la función de Elongin B con las respuestas al estrés celular, el control de la proliferación y la integridad del genoma. La desregulación de la ubiquitinación dependiente de Elongin BC se ha implicado en señalización oncogénica y en respuestas alteradas a la hipoxia, lo que convierte a ELOB en un nodo útil para estudios mecanísticos de redes de degradación proteica.

Elongin B El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ELOB sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Elongin B El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ELOB en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ELOB, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Elongin B. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ELOB y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Elongin B en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Elongin B en células tumorales con expresión de ELOB silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.