Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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elastin Double Nickaseプラスミド (h): sc-400640-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- elastin Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- elastinダブルニカースプラスミド（h）およびelastinダブルニカースプラスミド（h2）は、ELNを標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: elastin 抗体 (E-11): sc-166543
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
elastin Double Nickaseプラスミド (h) | sc-400640-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
elastin Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-400640-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ELNはエラスチンをコードしており、エラスチンは細胞外マトリックスの中核をなすタンパク質として弾性線維を形成し、動脈・肺・皮膚に反発性と弾力性を与えます。エラスチン単量体は分泌された後、ミクロフィブリル性の足場構造との相互作用やリシルオキシダーゼ（LOX）による成熟化を介して架橋され、エラスチン形成（elastogenesis）が進行します。これにより、組織の生体力学的特性とメカノトランスダクションが支えられます。エラスチンの量や配列（組織化）の乱れは、血管リモデリングや細胞外マトリックス恒常性に影響し、平滑筋細胞の表現型や結合組織の健全性を制御する経路とも交差します。ELNの機能異常や弾性線維の断片化は、血管および結合組織の遺伝性・後天性疾患と関連しており、マトリックス生物学を研究するうえで重要な遺伝子座です。
elastin ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ELN 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ELN内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ELNの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ELNが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。