elastin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400640-ACT

ヒトのELN遺伝子はエラスチンをコードしており、エラスチンは高度に架橋された細胞外マトリックスタンパク質として、動脈壁、肺、皮膚などの組織に弾力性と復元力を与えます。エラスチンはトロポエラスチンとして沈着し、マイクロフィブリルの足場上に組み立てられることで、マトリックスの構築と平滑筋細胞の挙動、メカノトランスダクション、細胞外マトリックス（ECM）リモデリング経路が結び付けられます。ELNの発現量とエラスチン線維の完全性は血管のコンプライアンスおよび結合組織の恒常性に影響し、エラスチン形成の異常は、動脈狭窄、動脈瘤への易罹患性、皮膚の弛緩を特徴とする遺伝性および後天性疾患と関連します。半減期の長いマトリックス成分として、エラスチンは発生、加齢、線維化に伴う組織バイオメカニクスの変化を扱うモデルで頻繁に研究されています。

elastin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ELNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

elastin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ELN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はELN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性elastinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のELN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるelastin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびELN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるelastin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。